Diagnostic du vivant de l'animal
Méthode : La tuberculination (test in vivo)
Principe
Il s'agit de mettre en évidence une réponse allergique (HSR) chez un bovin sensibilisé par des mycobactéries MTCB.
Pour la détecter, une substance à base de protéines mycobactériennes purifiées est utilisée. Ce mélange protéique est appelé PPD (PPD-B lorsqu'il est issu de « M. bovis »
) pour « « Purified proteine derivative »
» (dérivé protéique purifié) : il s'agit d'un haptène, c'est-à-dire une substance dotée de la capacité à être reconnue spécifiquement par les LT d'un animal infecté, mais non immunogène, et qui n'est donc pas capable de sensibiliser immunologiquement un bovin.
Pour en savoir plus, cliquez sur ce lien.
Attention :
Conséquence pratique : le test de tuberculination utilisé pour le dépistage de la tuberculose bovine fait appel à l'injection de PPD, qui permet de dépister un état d'HSR sans interférer avec le dépistage ultérieur de l'infection (cette injection peut être répétée chez un même animal après un délai d'au moins 6 semaines).
Méthode :
Objectifs, avantages et inconvénients respectifs et indications de l'IDS et de l'IDC
Deux tests d'intradermotuberculination sont utilisables en France :
L'intradermotuberculination simple ou IDS : elle consiste à injecter de la PPD-B pour détecter un état d'HSR préexistant due à une infection par M. bovis ou par une autre espèce du complexe MTBC.
Attention :
Attention ! Les vaches infectées par des mycobactéries atypiques (complexe MAC ou « M. avium-intracellulare »
) peuvent aussi réagir à la PPD-B car les bactéries MTBC partagent des antigènes avec les MAC (qu'il s'agisse de mycobactéries de l'environnement, de souches de « M. avium »
pathogènes pour les poules ou de « M. avium sbsp. paratuberculosis »
, l'agent de la paratuberculose des ruminants).
L'intradermotuberculination comparative ou IDC : elle consiste à injecter non seulement de la PPD-B, mais aussi de la PPD-A, une PPD issue de M. avium, en partant du principe que la réaction immunitaire homologue est plus forte que la réaction hétérologue. En d'autres termes, en cas d'IDC, une vache infectée par M. bovis sera supposée réagir davantage à la PPD-B qu'à la PPD-A et inversement pour une vache infectée par une bactérie MAC.
Le tableau suivant présente les caractéristiques des deux tests.
IDS | IDC | |
|---|---|---|
PPD injectées | Injection de PPD-B | Injection de PPD-B et de PPD-A |
Objectif | Mise en évidence d'une réponse allergique vis-à-vis des mycobactéries (MTBC et MAC) | Différenciation d'une réponse allergique vis-à-vis de de |
Avantage | - Sensibilité relativement bonne : 76 à 94 % - Plus simple de réalisation que l'IDC (un seul point d'injection et de lecture) | Spécificité > IDS : 78,8 à 100 % |
Inconvénient | Spécificité < IDC (réaction si infection par mycobactéries atypiques : 91,0 à 98 % | - Sensibilité < IDS : 50 % - Plus contraignant techniquement (deux points d'injection et de lecture) |
Indication traditionnelle pour le dépistage | Dépistage en 1ère intention | - Dépistage en 2ème intention (si résultat IDS non négatif) - Dépistage en 1ère intention si mycobactéries atypiques dans les élevages |
Indication actuelle (cf. infra) | Dépistage en 1ère intention en Corse | Dépistage en 1ère intention dans toute la France (sauf Corse et Camargue) |
Méthode :
Matériel
Les IDS et les IDC doivent être réalisées par un vétérinaire sanitaire selon un protocole strictement réglementé (cf. infra), et ce d'autant plus que la lecture n'est pas automatisable. Il en résulte que tous les facteurs permettant de réduire le niveau d'erreur, de biais ou d'incertitude au niveau de la réalisation technique et de la lecture ont été pris en compte, du moins en théorie.
Matériel de contention
Il doit être adapté en fonction de la race et du mode d'élevage : cornadis, couloir, cage de contention... et doit être disponible le jour prévu pour la tuberculination, sous la responsabilité de l'éleveur (avec l'aide éventuelle du Groupement de Défense Sanitaire (Figure 3.5).
Matériel de tuberculination
Le matériel dont doit disposer le vétérinaire sanitaire est le suivant :
Ciseaux ou tondeuse, à la fois pour pouvoir injecter dans le derme et pour mieux repérer le site de l'injection le jour de la lecture. Il faut proscrire le rasoir, qui peut irriter la peau.
Seringues homologuées pour injecter la/les PPD par voie strictement intradermique, à raison d'une seringue qui est strictement réservée à chaque PPD (avec un code couleur différent pour la PPD-B et pour la PPD-A). Ces seringues doivent être entretenues avec soin pour ne pas fausser le volume injecté. Actuellement, seules les seringues ci-dessous sont autorisées. Elles sont calibrées pour délivrer 0,1 ml de PPD.
Voir le tutoriel de la SNGTV dédié à l'utilisation de la seringue Mc Lintock® sur le site de vimeo.
Cutimètre à ressort homologué :
Il permet de lire de façon objective l'épaisseur du pli de peau avant injection de la/des PPD et lors de la lecture de la réaction tuberculinique. Les résultats sont exprimés en millimètres (mm). Aucune lecture subjective n'est autorisée réglementairement, que ce soit pour l'IDS ou pour l'IDC.
- La PPD bovine (PPD-B) PPD-B pour IDS et IDC et La PPD aviaire (PPD-A) pour IDC :
Elles sont injectées en intradermique sous un volume autorisé de 0,1 mL.
Méthode :
Réalisation technique, résultats, interprétation
Les différentes étapes et les modalités de réalisation sont résumées ci-dessous. Les particularités de l'IDC par rapport à l'IDS sont mentionnées en rouge.
Sources : Photos n°,1, 2, 4, 5 et 6 : GDS64 ; Photo n°3 : GDS 18 ; Photo n° 7 : EnvA
Ci dessous une présentation alternative, sans doute plus lisible, avec des illustrations claires et homogènes.
Inconvénient : Cette alternative fait un peu doble emploi avec la vidéo qui est dessous
Complément : Pour aller plus loin
La SNGTV propose un film sur la réalisation technique d'une IDC et sa lecture :
Méthode :
Expression et interprétation des résultats
IDS | IDC | |
|---|---|---|
Expression quantitative des résultats à l'échelle individuelle | Calcul de l'épaississement au point d'injection de la PPD-B : ΔB = différence entre l'épaisseur finale et l'épaisseur initiale (en mms) → ΔB ≥ 4 mm → POSITIF ΔB ≤ 2 mm → NÉGATIF 2 mm < DΔB < 4 mm → DOUTEUX | 1/ Calcul de l'épaississement au point d'injection de chacune des PPD, PPD-B et de PPD-A / ΔB et ΔA respectivement, 2/ Puis calcul de la différence d'épaississement entre la réaction aux 2 PPD : ΔB – ΔA → Si DB ≤ 2mm : → NEGATIF (quel que soit le résultat de ΔB – ΔA) → Si DB > 2 mm : - ΔB – DA > 4 mm → POSITIF - ΔB – DA < 1 mm → NÉGATIF - ΔB – DA [1 – 4 mm] → DOUTEUX |
Interprétation à l'échelle du troupeau | Un résultat non négatif à l'IDS → élevage suspect | Interprétation réalisée à l'échelle du troupeau, à l'aide d'un graphique Voir le document Interprétation des résultats du test IDC [pdf] Se reporter à la figure suivante |
Des exemples de résultats et d'interprétation à l'aide de ce graphique figurent ci-après :
A noter que chaque animal du troupeau qui a été testé par IDC est représenté en abscisse par sa ΔB et en ordonnée par sa ΔA. C'est la répartition des réactions des animaux sur le graphique qui est divisée en 3 zones définies par les 2 droites (ΔB – DA > 4 et ΔB – DA < 1 mm.
Données du graphique |
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Résultats | Négatif | Douteux | Positif |
Interprétation | Réaction due à des MAC | Infection par des MAC probable mais ne pouvant être infirmée à ce stade | Infection par une MTBC probable mais ne pouvant être affirmée à ce stade |
Méthode : Le dosage de l'interféron-γ (test in vitro)
Principe
Le test de dosage de l'interféron-γ (test INFγ) est un test « in vitro »
alternatif à la tuberculination, qui est basé sur la détection de la réponse immunitaire à médiation cellulaire, tout au moins d'un de ses effecteurs, l'interféron-γ , lorsque ces lymphocytes T sont mis en présence de haptènes/antigènes de MTBC (cf. 1ère partie et figure sur les Étapes de réalisation du test de dosage de l'interféron-γ).
Méthode :
Avantages et inconvénients du dosage de l'interféron-γ par rapport à l'intradermo-tuberculination (IDT)
Ils sont résumés dans ce tableau :
Avantages | - 1 seul déplacement - Aucun délai entre tests ou après test IDT - Lecture objective (test ELISA) - Réponse légèrement plus précoce qu'à l'IDT - Sensibilité : ≈ IDS et > IDC - Spécificité : > IDS et ≈ IDC |
Inconvénients | - Coût unitaire = 50-60 € (IDS = 3-3,50 € et IDC = 7,50-10 €, mais y ajouter le coût du 2ème déplacement du vétérinaire) - Délai acheminement du sang au laboratoire < 8h avec maintien à 20°C |
Méthode :
Mise en œuvre
Cliquez sur les images pour les zoomer
Etape 1 Prélèvement en élevage
Le prélèvement de sang sur tube hépariné permet la récupération de lymphocytes T (LT) qui vont être stimulés au laboratoire |
Etape 2 Acheminement au laboratoire agréé
T° = température La conservation à température ambiante et l'acheminement rapide au laboratoire sont tous deux nécessaires pour préserver la viabilité des LT mémoires (LTm) qui seront stimulés pour produire des IFNγ en cas de sensibilisation préalable par des mycobactéries |
Étape 3.1 Stimulation des lymphocytes T mémoires (si présents)
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Étape 3.2 Stimulation des lymphocytes T mémoires (si présents)
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Cliquez sur les images pour les zoomer
Étape 1 Prélèvement en élevage
Le prélèvement de sang sur tube hépariné permet la récupération de lymphocytes T (LT) qui vont être stimulés au laboratoire
Étape 2 Acheminement au laboratoire agréé
T° = température
La conservation à température ambiante et l'acheminement rapide au laboratoire sont tous deux nécessaires pour préserver la viabilité des LT mémoires (LTm) qui seront stimulés pour produire des IFNy en cas de sensibilisation préalable par des mycobactéries
Étape 3.1 Stimulation des lymphocytes T mémoires (si présents)
Étape 3.2 Stimulation des lymphocytes T mémoires (si présents)
